高效液相色谱(澳门新葡萄赌场娱乐hplc)仪器及技

2020-04-11 21:31 来源:未知

(2)稳定性好、脉动小

无油隔膜真空泵

(1)最常用的:紫外检测器(uvd)(占70%左右)、荧光检测器(fld)(占10%) 、视差折光检测器(rid )(占3%)、其他检测器(如质谱等等,占17%)。

针式滤器

因为hplc的样品都为溶液,而溶液受温度影响很大,例如:温度对溶剂的溶解能力、色谱柱的柱效、流动相的粘度都会产生影响。如果温度升高,可能会提高溶液在流动相中的溶解度,可以降低分配系数k;降低流动相粘度可以降低柱压,有利于保护色谱柱,延长色谱柱的寿命。但是,温度不能太高,否则会产生气泡。

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1)定义

名称

上述仪器条件的设置,在有些仪器上是不需要的,因为由于计算机的发展和普遍应用,很多仪器的坐标设置,完全由仪器的计算机自动设置。

量程范围: 0.01-2.56AU/FS(9档)

冷态开机,预热30分钟,设恒流泵的流速1ml/min;检测器设置:仪器调整到最灵敏度档(如:0.005aufs;即纵坐标设置为0.005au);波长λ=250nm(有人设置500 nm,但最好测试250 nm)、0 abs(即时间扫描,吸光度和时间都从0点开始测试),光谱带宽(sbw)=2nm(固定光谱带宽的仪器不能选择),连续测试1小时,可以用仪器上的crt指示噪声在这1小时里,任取10分钟(包含最差的峰-峰值),在这10分钟里取峰对峰值(p-t0-p)的最大值,就是仪器的噪声。但是,10分钟里的峰对峰(p-t0-p)值,不同于10分钟里的任一地方的峰-峰(p-p)值,即:“10分钟里的峰对峰”值,不等于瞬时的峰-峰(p-p)值。测试数据前面应加“±”符号。目前,国际上基本上采用这种方法测试hplc仪器的动态噪声。有时候,为了节省时间,也可以在漂移测试的基础上检测噪声。但是开机时间就不是30分钟,而是2小时。这样所得测试数据稍小于开机30分钟的数据(因此,给出数据时要说明方法),数据处理方法仍如上所述。

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目前国际上的hplc仪器,一般都具有梯度洗脱功能;因为,往往等度洗脱不能解决的分析工作,如果采用梯度洗脱的方法,就可能很好的解决问题。因此,hplc的使用者,往往需要仪器的高压泵具有流速程序和梯度洗脱程序。

压力线性和准确度: 压力为10MPa、20MPa时,泵的显示压力误差小于0.5MPa

hplc仪器的进展发展很快,远不止如上所述。因篇幅所限,此不赘述。

波长范围:190-700nm

3)目前国内外的hplc制造商,往往在仪器样本上给出的都是检测器的静态噪声,同时注明了仪器的状态(检测器空池)。这样做,对于使用者了解整个仪器系统中的检测器性能有利,也是可以的。但是不符合使用者的总体要求,因为使用者的总体要求是:整个hplc系统(包括泵、柱、检测器)处在使用状态(动态)的情况下,整机的噪声有多大。所以,作者认为静态噪声可以给出,也可以不给出,但是动态噪声必须给出。

双泵梯度高效液色谱仪

该仪器为国内最早推向市场的超快速高效液相色谱仪,与常规hplc相比,分离能力强,出峰对称性更好,基线更稳定,分辨率更高,分析时间大大缩短,降低了客户成本。

基线噪声: ≤1.0×10-4 AU

(四)hplc仪器的最新进展

有机相溶剂过滤膜

4)上海通微公司的高效微流电色谱仪和定量毛细管电泳仪问世

水相溶剂过滤膜

(7) 具有梯度洗脱功能

型号规格

hplc一般都是由输液系统(泵) 、进样系统 、 分离系统(柱)、检测系统、数据处理系统组成。各部分简述如下:

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2)李昌厚著,仪器学理论与实践,北京:科学出版社,2008

清单

hplc的色谱柱主体组成(结构)如下:

液相保护柱套

2)量程范围测试方法

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2、毛细管和纳升高压液相色谱仪的发展,美国dionex公司生产ulti mate毛细管和纳升高效液相色谱仪,可进行微柱、毛细管柱和纳升柱三种微柱液相色谱分析。

主要性能特点:

作者简介:

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2、分离系统(色谱柱)

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2、检测限测试方法

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(4) 流量重复性好

流通池体积: 8ul

3、检测系统

最高工作压力: 42MPa

李昌厚,男,中国科学院上海生物工程研究中心原仪器分析室主任、兼生命科学仪器及其应用研究室主任、教授、博士生导师、华东理工大学兼职教授;终身享受国务院政府特殊津贴。

HAD-C2900系列高效液相色谱仪,是我公司根据进口技术研制开发的实验室分析仪器,由HAD-2910型高压微机宝石恒流泵、HAD-V2930型可变波长紫外检测器,进样分离系统三部分组成。该仪器系统性能优良,质量可靠,经济实用,特别适用于制药、精细化工、农业、食品、饲料、煤炭、染料等行业。

1、二维及多维液相色谱仪的发展:美国eksigent公司和日本kya tech公司生产的纳升级二维高效液相色谱仪,其组合了纳米微柱和二维液相色谱技术,可直接用于蛋白质组学、基因组学研究工作中。

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(5)死体积小

波长重复性: ≤0.4nm

(2)正相色谱柱:正相色谱柱也经常被使用,约占20%左右。

3.无须更换光源检测波长范围可拓宽至可见光谱范围。

1)光学类检测器基本功能:提供准确的波长、提供足够小的检测限(灵敏度,这是用户最关心的问题之一)、提供小的噪声、飘移和重复性,给出最终检测结果。

主要性能特点:

高效微流电色谱仪为国家科技部“十二五”重大攻关项目,是国际首创的一种新型hplc仪器;在柱效、分离速度等很多方面都优于uplc,其柱效比uplc高10倍、5秒钟可以分离5个芳香烃(一般hplc需要10-20秒)。该仪器总体优于uplc,又是一个国际首创。定量毛细管电泳仪也是国际首创(一般毛细管电泳仪,定量分析精度很差)。

4.仪器具有过压保护和断电保护功能,并设有自诊断程序。

(2)波长准确度:影响摩尔吸光系数、影响仪器的灵敏度,比较仪器时很重要。

基线漂移: ≤1.0×10-3AU/h

讲hplc的指标、给出hplc的谱图,应该实事求是的给出使用的灵敏度量程(一般使用最灵敏量程),给出样品浓度(一般是噪声的3倍左右),才能说明仪器的检测限或灵敏度。

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作者在研发检测器和使用hplc时所采用的测试动态噪声方法如下:连接恒流泵、液相色谱分离柱和检测器。在恒流泵和检测器中有移动相(流动相)流动。

压力脉动: 0.1MPa (流量为1mL/min, 压力8.5MPa条件下)

4) 几种特别值得重视的hplc检测器

最小检测量: 4×10-8g/mL(萘的甲醇溶液)

hplc的色谱柱(分离柱)是极其重要的部件之一,根据填料的不同一般可分为:反相柱、正相柱、其它柱三类,分别简述如下。

波长精度: ±1.0nm

5)这里特别需要提出的是:目前有些国外hplc生产厂商,为了吸引用户,制造了一些违背仪器学理论的指标。例如:国外某厂商,在招标中给出hplc的噪声时,先采用计算机对噪声进行平滑,并且采用最大量程测试,结果给出的hplc噪声非常小、谱图基线非常平直、谱峰尖而陡直,给人的印象是世界一流的hplc。其实不然,给出的数据和谱图都是虚假的。如果用盲样进行比对测试,因为他们的hplc的噪声大,信噪比差,灵敏度差,所以立即败下阵来。

1.先进的全息凹面光栅的单色仪结构,使本仪器具有较高的灵敏度。

色谱柱的筛板(过滤板)一般是用不锈钢或钛合金材料制作,其孔径一般在0.2-20μm之间,孔径大小主要取决于柱填料的粒度,它是一个非常重要的零件,它可以防止填料漏出。同时,防止色谱柱工作时杂质进入柱内引起分离效果下降,甚至容易引起色谱柱堵塞等等。色谱柱与输液管连接处一般需要使用不锈钢制作的卡套和不锈钢制作的固紧接头螺钉,它们也非常重要,否则色谱柱系统会漏液,结果使柱压下降、流动相或样品漏出,严重影响分析测试结果,甚至不能进行分析测试工作。

序号

目前,国际上对hplc的uvd的量程范围设计指标,一般在0.005-3.0aufs内。作者在研制hplc的uvd检测器时,用原上海大华仪表厂生产的xwt-204记录仪的1v档测试。当对数放大器的差分放大器的总输出为1v时,记录仪满度(100格)。当仪器的有效光电信号从0.005-3.0v时,均可保证对数放大器的输出为1v;此时,这个0.005-3.0v对应的吸光度为0.005-3.0abs。要求从0.005-3.0abs时,光度准确度都能保证在1%以内(即1v±10mv)。如此测量3次并取均值,即是hplc的量程范围(0.005-3.aufs)。

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目前,国内外很多hplc仪器的uvd生产厂商不给仪器的量程,这是不妥的。因为,不给量程范围就意味着不知道检测器的灵敏度(下限),不知道多少吸光度时仪器能达到满度。当然,目前有很多hplc仪器的uvd生产厂商,给出了仪器对某一物质的最小检测浓度或最小检测量,这在某种程度上也可以反映仪器的灵敏度,并且对使用者来说,比较方便、比较直观。但是,这种表示方法只是对某一物质而言,特别是会带来样品处理产生的误差、容易低估仪器噪声的影响,因此,从仪器学理论的角度来看是不科学的。

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hplc灵敏度的测试方法:主要根据信噪比的定义进行测试。一般取信号等于或大于噪声2倍时的检测量或浓度(信号强度)作为hplc的信号大小。信号与噪声二者相除即为仪器的信噪比(灵敏度,但是要求s/n≧2)。

主要技术指标:

5、重复性及其测试方法:与漂移测试方法相同,对仪器进行多次测试(作者认为一般是5-7次),其数据的符合程度就是重复性,一般用rsd表示。

◆HAD-2910 型微机宝石恒流泵

5、新型的hplc仪器不断问世

溶剂过滤瓶

耐高压是hplc系统对高压泵的基本要求之一,一般来讲,平均粒径为4µm左右的填料、内径为5mm左右的色谱柱,当流动相流速为1-3ml/min时,要求输液泵的最高工作压力达到34.47-41.36mpa(5000-6000psi)目前国际上商品hplc泵的最高工作压力一般为41.36mpa (5000psi)左右。但随着填料粒径的不断减小,粒径为1-2.5µm范围的小粒径无孔色谱填料的应用推广,流动相在色谱柱中的阻力会更大,所以,2004年国际上出现了超高压液相色谱,要求输液泵能够耐更高的压力。目前市场上已有达到68.94mpa(10000psi)的高压恒流泵(如:altex 100a)。

泵的密封性: 压力为30MPa,时间为10min,压降不大于0.5Mpa

很多hplc的泵的流量重复性可以达到0.07%(rsd)。但是重复性与测试方法有关,目前国际上一般采用两种方法测试:一是重量法,收取泵的单位时间里的流出液,在天平上直接称其重量,判断重复性;二是保留时间法,根据保留时间的长短,来判断流量的重复性。在hplc的分析工作中,其定性分析一般是根据保留时间。高压泵的重复性(rsd)是极其重要的指标之一,也是影响hplc整机系统重复性的一项非常重要的性能技术指标。

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hplc的噪声是一种与被测样品无关的、随机输出的信号。国际上对噪声的定义、测试方法各异。例如:美国材料协会制订的测试标准(astm),规定噪声分为长噪声、短噪声、和超短噪声三种。长噪声是指每小时内有6个至60个变化周期的噪声,所以,测定时间至少应该测试一小时;短噪声是指每小时内有1个至10个变化周期的噪声,所以,测定时间至少应该测试10分钟至60分钟内;超短噪声是指每分钟内有10个以上的变化周期的噪声,所以,测定时间应该大于1分钟。

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1、输液系统(高压泵)及其重要性

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目前国际上hplc的高压泵,大多数流动范围可以达到0.001-10.0ml/min(制备色谱的流量更大,有时要求达到数千ml/min),可以同时满足各种不同内径的色谱柱的分析工作要求。

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从类型上来说,色谱柱可以分为制备型和分析型两大类,一般分析型的柱使用最多。如果细分,色谱柱又可以分为常规柱、窄径柱、毛细管柱、制备柱和半制备柱等等。为提高分析速度,有人经常使用短柱,其柱长5-10cm,填料粒径多为3μm左右。很多分析工作者比较强调分析灵敏度,因此发展了窄径柱、毛细管柱和微径柱。这些柱子的优点是:所需样品少、所需流动相少、灵敏度高、容易控制温度。但是它们对检测器的流动池、柱外的管道、接头、进样阀等要求大大提高了。

含2910型微机宝石恒泵2台、2930紫外分光检测器1台、9810六通进样阀1只、C18-250mm*4.6色谱柱1根

从事hplc仪器研发和使用的科技工作者,只有重视仪器学理论才能做好hplc仪器、才能用好hplc仪器。仪器学理论是一把金钥匙,一通百通,它可以使你做出稳定可靠的优质hplc仪器,使你在使用hplc仪器时,能够调整好最佳仪器条件、保证得到准确可靠的分析检测数据。

2.双光路、光纤传输光学系统,最大程度地减少噪声和漂移,允许工作至0.01AU。

除上述几点外,对hplc的高压泵的要求还有耐用、流速可控程、具有压力检测保护功能、维修方便等。虽说不是所有的泵都要求具有上述要求,但是很多泵具有这些功能,例如:美国waters公司的alliance系列、美国agilent公司的1200系列;中国北京普析通用公司的l600系列、大连的依利特公司的p230系列、上海伍丰公司的lc-100系列和浙江福立公司的lc1190系列高压泵等,基本上都具有这些功能,一般都能满足液相色谱分析工作的要求。

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3、超高压液相色谱仪(uplc)自从2004年waters公司推出acquity uplc后,jasco、agilent、thermo-fisher scientific、shimadzu、dionex、hitachi、上海通微等都先后推出了各自的超高效液相色谱议。

◆HAD-V2930 型紫外分光检测器

仪器能适用测量的范围或仪器能满足测量要求的范围叫量程范围。其表示方法为aufs(absorbance unit full scale)或au/fs(absorbance unit/full scale)。80年代以前,也有很多人用od(光密度)这个概念表示abs(absorbance),即用odfs来表示uvd的量程,但是od不符合光对物质吸收的物理概念,不符合仪器学理论,所以,目前国际上已经废除“od”概念,不能再使用“odfs”了。

显示方式: LED数字

第三代lc-100可选择分析型系统、半制备型系统、制备型系统。新增全新溶剂管理器,可实现在二元梯度系统基础上轻松切换至4-8种溶剂,并可选配脱气单元及柱温箱,大大提升用户体验。可选择手动进样或自动进样系统,数据工作站分析软件可根据客户需求提供两个版本的选择,符合gmp、fda、3q等认证需求。

4.采用面板触摸开关,不须繁琐的功能调整,自动调零。

3、从仪器学、分析化学和应用实践的要求来讲,目前国产hplc要求基本上都能满足使用要求,并且深受国外科技工作者青睐。国产高档hplc产品已经出口到国外(包括发达国家和发展中国家);而国人却盲目迷信进口hplc,大量进口国外的hplc,中国的hplc主市场仍被外国仪器占领,实在令人费解。中国的科技工作者,应该从民族高度看国产仪器和进口仪器。在购买、使用各类hplc仪器时,应该要有爱国情怀,要有骨气,要大胆使用能满足使用要求的国产仪器。

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高压泵的质量直接影响整个hplc的质量,是用户关注的核心部件之一。hplc高压泵的重要性及使用者对高压泵的具体要求如下:

高效液相色谱仪 型号:HAD-C2900

2)色谱柱分类:

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(5)噪声:非常重要,一般光谱仪器有多大的噪声,就可能在测试结果中增加多大的误差。

流量精确度: ≤1%

(8)量程:应重视最灵敏量程,不能用最大量程测试仪器的灵敏度(后面将有论述)。

超声波清洗器

色谱柱的柱效是最重要的关键指标,一般都取决于固定相的性能和装柱技术。一般hplc的色谱柱固定相(填料)大致有三种:硅胶或以硅胶为基质的填料、聚合物填料和无机物填料。正相色谱柱大多采用硅胶类填料,反相色谱柱则多以硅胶为基质组成的官能团类的填料。以聚合物为填料的色谱柱最大的特点是ph值可在1-14之间都能用,疏水性强。但无机填料色谱柱一般只是限于特殊用途,比较少用。

3.可存储十种工作程序。

检测器种类很多也非常重要,但是使用最多的是光学类检测器,占比约75%左右,这里重点光学类检测器。

流量准确度: ≤2%

(6)稳定性(含漂移、重复性):它直接限制光谱仪器的可靠性。

光 源: 氘 灯

主要研究方向:分析仪器及其应用研究;长期从事光谱仪器(紫外吸收光谱、原子吸收光谱、旋光光谱、分子荧光光谱、原子荧光、拉曼光谱等);色谱仪器(液相色谱、气相色谱等)及其应用研究;特别对《仪器学理论》等有深入研究。

1000ml

注意:开机30分钟后,仪器调整到最灵敏度档(如:对量程为0.005-3.0aufs的仪器,取0.005aufs,即纵坐标设置为0.005a);设置波长λ=250nm(有人设置500 nm,但最好测试250 nm);设置0 abs(即时间扫描,吸光度从0点开始测试);光谱带宽(sbw)=2nm(固定光谱带宽的仪器不需选择)。

光谱带宽: 8nm

光学类检测器是所有检测器中使用最多的一种,它的主要技术指标如下:

5.可作单泵恒流输出亦可双泵构成梯度淋洗。

淋洗液从hplc柱子进入 corona (1) →在气腔中被氮气或空气雾化 (2) →小液滴进入干燥管 (3) →大液滴进入废液管 (4) →干燥的颗粒进入混合腔(5) →另一路气流经过带电corona体(6) →带电气体和干燥的颗粒混合使颗粒带电 (7) →离子阱把多余的电荷去除(8) →带电颗粒进入采集器,电荷被高灵敏度静电计测量(9)→信号传输到色谱数据软件(10)

流量范围: 0.001-9.999 (ml/min)

1、灵敏度的测试方法

主要技术指标:

(二)结构组成及各个部件的重要性

2.活塞、单向阀及阀座均为宝石,采用进口密封圈,故密封性能好且经久耐用。

3) 李昌厚著,紫外可见分光光度计仪器及其应用,北京:化学工业出版社,2010

数量

工作原理图如下图所示:

1.微机控制通过键盘设定各种参数,并由液晶屏幕显示各种参数,操作简便醒目。

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